Aflatoxin B2 ELISAKit instructions

This kit is for research use only.

1 purpose:

This kit can be used for corn, rice, wheat, beans, peanuts, peanut butter, aflatoxin B2(AFB2) residues in the quantitative detection.

2 the experiment principle

This kit adopts the direct competitive ELISA method, the MPP packages are aflatoxin B2 (AFB2) coupling resistance to the original, join the aflatoxin B2 (AFB2) standard or sample, free aflatoxin B2 (AFB2) microporous article on aflatoxin B2 (AFB2) in the process of the package is coupling antigen compete against aflatoxin B2 (AFB2) enzyme markers, with TMB substrate color, add color changed from blue to yellow, after termination of liquid enzyme under 450 nm wavelength for testing the instrument, absorbance values with the sample of aflatoxin B2 (AFB2) is inversely proportional to the content, through standard curve to calculate samples aflatoxin

The content of B2 (AFB2).

3 kits of

3.1 aflatoxin B2 (AFB2) in the process of the package is coupling antigen detachable enzyme label plate: 1 piece (12 hole article x 8).

3.2 aflatoxin B2 (AFB2) standard: six bottles (1 ml/bottle), content, respectively is: 0 PPB 0.2 PPB, 0.6

PPB, 1.8 PPB, 1.8 PPB, 5.4 PPB.

3.3 resistance to aspergillus flavus toxin B2 (AFB2) antibody enzyme combination: 1 bottle (6 ml).

3.4 A: color liquid 1 bottle (6 ml).

3.5 color liquid B: 1 bottle (6 ml).

3.6 terminated liquid: 1 bottle (6 ml), 2 m sulfuric acid.

3.7 sample diluent: 1 bottle (10 x, 6 ml), for the sample dilution.

Concentrated liquid detergent 3.8:1 bottle (20 x, 20 ml), is used to wash the plate.

A 3.9 specification.

4 need not provide materials

4.1 equipment 4.4.1 wavelength of 450 nm enzyme standard instrument. 4.1.2 grinder. 4.1.3 measuring cylinder. 4.1.4 oscillator. 4.1.5 funnel.

4.1.6 Whatman No. 1 filter paper or equivalent.

4.1.7 trace pipetting device.

4.2 reagent

2 deionized water or distilled water.

4.2.2 methanol.

5 storage

5.1 kit storage in 2 ~ 8 ℃, do not freeze

5.2 MPP should not use up dry seal save six points for attention

6.1 please read the instructions carefully before using the kit.

6.2 don't use outdated kit.

6.3 kit before use, to return to room temperature (25 + 2 ℃), suggested that returns at least two hours.

6.4 standard product containing aflatoxin B2 (AFB2), should pay special attention to when using, should wear gloves when operating.

6.5 terminated liquid containing sulfuric acid, when using, prevent corrosion burn skin and clothing.

6.6 the standard and sample used different suction cannot mix, otherwise it will affect the test result.

6.7 reagent can not mix of different batch number kits; The standard and sample used different suction head must not be mixed, otherwise it will affect the result of the experiment.

6.8 diluted sample must be used in this kit sample diluent, otherwise it will affect the result of the experiment

6.9 mixed reagents should avoid foaming.

7 working liquid preparation

7.1 aflatoxin B2 (AFB2) standard solution: 0 PPB 0.2 PPB, 0.6 PPB, 1.8 PPB, 5.4 PPB, 16.2 PPB

7.2 concentrated liquid detergent: press with distilled water and (1 + 19) dilution. Set aside

7.3 sample diluent, diluted with distilled water at 1:10 (1 + 9) and set aside

Chromogenic agent 7.3: has the spare, avoid the light shines

7.4 reactions terminated liquid: already set aside

8 sample processing: (sample in extraction process, in strict accordance with the manual operation, should be accurate in the process of extracting diluted, otherwise it will appear the result is not accurate, the samples should be stored in a cool, dark place and cold storage) general sample processing

8.1 samples from 10 g crushed, add 20 ml 70% methanol solution

8.2 strong oscillation for 3 minutes

8.3 with Whatman No. 1 filter paper filter

Take 100 (including 8.4 l treated samples, add in 400 (including l sample diluent

8.5 take 100 mu l diluent carries on the analysis of animal tissue before processing

8.6 accuray said 1 + / - 0.05 g homogenate after tissue samples to 50 ml of polystyrene in the centrifuge tube; Add 3 ml of acetonitrile - propyl

Acetone extract solution, 2000 RPM volatility more than 20 s 4000 r/min after 5 min

8.7 take the supernatant 0.8 ml in 50 ℃ dry nitrogen flow

8.8 to 3.2 mL sample diluent, 750 RPM vortex 20 s

Take 100 (including 8.9 l used to analyze the feed pretreatment method

8.10 accuray said 1 + / - 0.05 g grinding feed samples to 50 ml of polystyrene in the centrifuge tube; Add 4 ml of acetonitrile, 1 ml

Acetone, 2000 RPM volatility more than 20 s 4000 r/min after centrifugal 3 min 8.11 take supernatant on 0.7 ml at 50 ℃ dry nitrogen flow

8.12 to 2.8 mL sample diluent, vortex 20 s, 100 (including l blending after pretreatment method is applied to the analysis of milk

8.13 take 1 ml to 5 ml milk sample polystyrene in centrifuge tube; Add 4 ml sample diluent, 100 (including l for points after blending

analysis

Milk powder before treatment

8.14 accuray according to 0.3 g milk powder samples to 7 ml of polystyrene in the centrifuge tube; Add 2 ml PBS solution, 2 ml is alkanes, blending oscillation

8.154000 r/min, the centrifugal 5 min to remove organic layer and layer, the lower solution (including l to 400 (including 100 l sample dilution

liquid

Blending after 100 (including 8.16 l for analysis

9 enzyme analysis step 9.1 experimental instructions

Please send before the start of all reagents 9.1.1 experiments in carton fully restored to room temperature (25 + 2 ℃), about 2 hours. Back to room temperature (25 + 2 ℃) and then remove the pores, excess microporous article to seal in 2 ~ 8 ℃ dry immediay save note: must ensure full back to the temperature, or influence the accuracy of the detection and accuracy.

9.1.2 immediay after using to save reagent back 2 ~ 8 ℃ 9.1.3 please don't change analysis program 9.1.4 please use accurate liquid moving trace

9.1.5 operation once you begin, please don't interrupt any program

9.1.6 ELISA result repeatability heavily depends on the operating procedures, please in strict accordance with the requirements 9.1.7 operation to avoid cross contamination, each standard should be used with samples of different suction plus sample 9.1.8 and do not let suction contact solution or the inner surface of microporous 9.2 analysis steps

9.2.1 numbered in advance, mark B0, standard and the sample position, recommend detection of double orifice

9.2.2 take the required number of microporous article (microporous detachable), will be extra strip seals and immediay back 2 ~ 8 ℃ save 9.2.3 sample diluent, concentrated liquid detergent (20 x) diluted into a working fluid (distilled water or deionized water dilution)

9.2.4 add 50 (including in B0 hole l0.0 PPB standard solution

9.2.5 hole in each standard adding standard solution of 50 mu l 9.2.6 add 50 (including l in each sample hole sample solution

9.2.7 in all holes to join (including 50 l of aflatoxin B2 (AFB2) antibody enzyme combination 9.2.8 gently shaking reaction plate for a few seconds.

9.3 37 ℃ warm bath 30 min (warm bath tap from time to time in the process of reaction plate, can reduce the error of double holes)

9.3.1 dump liquid in the hole, use wash washing MPP 5 times, the last time should flap on the blotting paper in order to compley remove the pore fluid in the body.

9.4 the reaction

9.4.1 washing procedure is completed, immediay with trace pipetting device in each of the microporous to join (including 50 l color liquid A, add 50 (including l color liquid B; Slight shake reaction plate make thorough blending

9.4.2 37 ℃ warm bath for 10 min

9.4.3 add 50 (including l terminated liquid, each hole grinder

9.4.4 detection under 450 nm absorbance, and the results read within 5 min.

10 the results calculated

10.1 quantitative analysis

10.1.1 for each concentration of standard solution and sample absorbance value (B) divided by the average of the first standard (0) the absorbance value (B0) multiplied by 100%, the percentage of absorbance values. B - the average of the standard solution and sample solution absorbance values

B0 - the average absorbance value 10.1.2 0 PPB standard solution to aflatoxin B2 (AFB2) concentration of values for the X axis, percentage of absorbance value of Y, drawing standard curve graph. Samples according to the percentage of absorbance values, the abscissa corresponding points can be obtained from the curve, is the concentration of aflatoxin B2 (AFB2) of numerical value, obtained against the number is the determination of aflatoxin B2 in liquid (AFB2) concentration C (PPB) 10.1.3 due to sample after dilution in advance, so according to the standard curve of concentration of the sample must be multiplied by the dilution multiple.

10.2 semi-quantitative determination 10.1.1 visual semi-quantitative determination: first select an appropriate standard solution and sample run, according to the sample and standard substance absorption

3

The value of high and low, determine the sample density is less than or greater than the standard values. 10.1.2 semi-quantitative determination instrument: first select an appropriate standard solution and sample with running, according to the sample compared with standard color shades, determine the sample density is less than or greater than the standard values.

11 specific material cross reaction

Yellow aspergillus toxin B2 (AFB2) 100%

This kit detection limit of 0.2 parts per 12 kits parameters B0 absorbance value should be greater than 1.0

Kit absorbance error less than 8% in the plate, the plate between the error less than 15%. Use this manual provides the method to extract tissue samples recovery is greater than 80%.

13 standard curve mode (for reference only)

Try the agent box to provide standard curve in the range of 0.2 PPB ~ 16.2 PPB.

Analysis of 14 limit testing positive for this kit samples should use another method, such as HPLC and GC/MS may confirm.