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目的建立β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的高通量篩選模型。方法從產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株中提取酶液,以硝噻吩為底物,三唑巴坦作為酶抑制劑,通過檢測(cè)反應(yīng)體系吸光度的變化,來(lái)判斷酶促反應(yīng)的進(jìn)行情況以及酶抑制劑的效果,建立384微孔板的高通量篩選模型,優(yōu)化反應(yīng)條件并對(duì)此模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。用此模型對(duì)7360個(gè)化合物組成的隨機(jī)庫(kù)進(jìn)行篩選。結(jié)果確定反應(yīng)體系條件為:*測(cè)定波長(zhǎng)為482nm,反應(yīng)溫度為30℃,選取15min時(shí)間點(diǎn)檢測(cè),底物硝噻吩終濃度為0.1mmol/L,評(píng)價(jià)指標(biāo)Z′因子在0.8～0.9范圍內(nèi),表明此模型可以用于高通量篩選。基于此模型初篩出65個(gè)有抑制活性的化合物。結(jié)論建立的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑高通量篩選模型具有快速、穩(wěn)定和微量的特點(diǎn),是尋找和發(fā)現(xiàn)有潛在活性的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的有效手段。
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